技术支持

1、 标本的固定：不当的固定方式或固定时温度过高，都会影响到所检测的抗原的数量和质量。查看一抗说明书或相关文献，使用推荐的固定液（如10%中性缓冲福尔马林固定液等）。

2、抗原的修复方式：煮沸修复和高压修复是国际公认的较好的修复方式，但具体使用那种修复方式应根据预实验结果或厂家说明书进行选择。

3、抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间是否正确。应参照使用范围，对所使用的一抗进行梯度测试，找出最佳的使用浓度。通常，如果背景染色很少或没有，可适当延长孵育时间。

4、切片上遗留了过多的冲洗液，当抗体加至切片上时，等于人为地对抗体进行了进一步的稀释。

5、 孵育时切片是否放置水平，否则会导致抗体流失。

1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色，这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。

2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体。

3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色。

4、非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果。

5、DAB孵育时间过长或浓度过高，可通过降低DAB浓度或者缩短孵育时间来降低背景染色。

6、PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要。

7、标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色，确保实验过程中保证切片的湿润。

8、抗体稀释液的pH值偏低和封闭血清的失效。